Exosomes/Extracellular Vesicles-盟基生物科技股份有限公司

Exosomes/Extracellular Vesicles

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Small targets, Big challenges 帶領您ㄧ窺細胞外囊泡的堂奧
(Exosomes/Extracellular Vesicles, EV) 


細胞外囊泡(EV)是由細胞分泌的膜結合小顆粒,被認為具有細胞間傳遞訊息的功能:將物質從一個細胞運送到另一個細胞。具多種亞型,其功能、物質和尺寸各不相同,直徑範圍約 30~1000 nm。最小的 EV 類型是外泌體(Exosome),大小約為 30~150 nm。 EV 起源於稱為多泡體 (MultiVesicular Body, MVB) 的細胞室,其本身源自內體(endosome)的內陷。當 MVB 與細胞質膜融合併釋放其物質時,以囊泡型式被釋放。 
在生物醫學研究中,外泌體及其攜帶物質被用作癌症和其他疾病的診斷生物標誌物。 EV 和外泌體可以使用超速離心、PEG 沉澱和免疫磁珠等技術從血液或其他生物體液中分離出來。 
外泌體膜含有源自原始細胞質膜的跨膜蛋白,通常包括四次跨膜蛋白(tetraspanin)家族的蛋白質(如 CD9、CD63 和 CD81)。在內部,外泌體包含蛋白質和RNA等細胞質成分。可以使用 RNAseq、Western blot和flow cytometry等方法分析其成份。


 
Extracellular vesicle(EV)。EV的功用就像細胞與細胞間的信件,幾乎所有類型的細胞都會釋放,是一種不能夠複製的脂雙層顆粒,能攜帶大量來自原本細胞的蛋白質、 核酸、脂質、代謝物,甚至胞器,種類有Exosomes、Microvesicles和Apoptotic bodies等等。
圖片來源:Wiktoria M. Suchorska and Michal S. Lach: The role of exosomes in tumor progression and metastasis (Review) Oncol Rep. 2016 Mar;35(3):1237-44.

藉由流式細胞分析法,研究人員可以使用針對膜和核酸等外泌體進行染色的螢光染劑,以及與四次跨膜蛋白或其他目標蛋白質結合的抗體。

盟基提供一系列外泌體(Exosome) 流式細胞儀驗證之抗體及胞膜染劑



一、流式細胞儀專用抗體,標定Exosome一管搞定
優勢
1. 所有抗體經實驗驗證
2. 使用單株抗體,具絕佳專一性
3. 搭載CF dye螢光亮度強又穩定
4. 應用Flow cytometry逐一分析,一顆不漏


不同的抗體一樣的精準標定,分析Exosome真easy
實例驗證
利用Flow cytometry先行分選出由MCF-7細胞所衍生exosome,再以不同螢光抗體進行標定。
灰色區域:未標定染色 ; 橘色區域:抗體標定染色。(括弧表示抗體clone來源/名稱。)
標定效果一把罩!

 
CD9 (1619) >CD63 (MX-49.129.5) >Ep-CAM (HEA125) >CD81 (1.3.3.22)


商品資訊:標定Exosome專用抗體
★ 抗體皆經驗證確認其標定效果 ★

 
抗體名稱 Clone名稱 Exosome 前處理驗證 染色強度 螢光選擇 備註
磁珠分選*1 SEC層析純化*2
CD9 (human) CD9/1619 +++ 高亮度螢光染劑 CF dye 光譜參照如右圖 推薦使用:螢光染色亮度高
CD9/2343
CD81 (human, mouse, rat) 1.3.3.22
rC81/3442
rabbit CD81 (human, mouse, rat) C81/2885R - ++ 效果稍弱於其他CD81抗體
CD63 (human, mouse) MX-49.129.5 + 可標定經磁珠分選但未純化之exosome
CD63 (human) LAMP3/968
Ep-CAM (human) VU-1D9 MCF-7細胞衍生exosome的Ep-CAM蛋白表現低,但仍可標定偵測l
rVU-1D9
EGP40/826+
EGP40/837+
EGP40/1110+
EGP40/1120
HEA125

*1. 利用磁珠(CD63-specific magnetic beads )搭配Flow cytometry先行分選出由MCF-7細胞衍生exosome
*2. 利用SEC層析管柱純化大小相近的MCF-7細胞衍生exosome




二、新型CF® dye螢光染劑,Exosome胞膜染色一級棒
優勢:
1. 螢光強度更高:優於目前市面上Alexa Fluor®等多數染劑
2. 背景值更低:CF® dye 負電荷較 Alexa Fluor®, DyLight®, IRDyes®少。去除染劑非專一性吸附,亦不影響抗體等電點
3. 穩定性更高:長時間照射,活性不減
4. 酸鹼耐受性更高:耐受範圍:pH 2~pH 11



應用:Flow cytometry
實例驗證:CellBrite®染色細胞外囊泡(exosome)
長效型染劑:CellBrite® Steady 405 可染色後固定:CellBrite® Fix 488 可染色後固定:“Highlight”期刊文獻引用
SEC層析MCF-7細胞所衍生的exosome,利用0.02X CellBrite® Steady 405染色(右圖),相較於僅有緩衝液的對照組(左圖):可看見特異性染色結果。 
*EVs were detected on a CytoFLEX LX flow cytometer in the Pacific Blue channel.
SEC層析MCF-7細胞所衍生的exosome,利用0.5X CellBrite® Fix 555染色(右圖),相較於僅有緩衝液的對照組(左圖):可看見exosome特異性染色結果。 
*EVs were detected on a CytoFLEX LX flow cytometer in the Pacific Blue channel.
利用CellBrite® Fix 488螢光染劑及rotavirus nucleocapsid抗體針對含有Wa的囊泡進行雙重染色。箭頭所指即為雙重標定的囊泡。



產品資訊:細胞外囊泡/Exosome膜染劑
染劑名稱 SEC層析純化*1 染色強度 已驗證過之螢光選擇 備註
CellBrite® Steady v
(PEG-enriched HeLa-derived EVs)
+++ 405, 488, 550, 650, 685 非共價鍵結
染劑對磁珠有非專ㄧ結合
MemBrite® Fix 405/430 405/430 以Pacific Blue channe分析
共價鍵結
可能不適合與抗體進行共染
CellBrite® Fix 488 & 555 v ++ 488, 555 以FITC and PE/Cy3 channe分析
共價鍵結
可能不適合與抗體進行共染
文獻參考*3
Di-8-ANEPPS   以紅色螢光分析
非共價鍵結
溶解度略低於其他染劑
文獻參考*4,5

*1. 利用SEC層析管柱純化大小相近的MCF-7細胞衍生exosome
*2. 利用磁珠(CD63-specific magnetic beads )搭配Flow cytometry先行分選出由MCF-7細胞衍生exosome
*3. Cell Host & Microbe (2018) Aug 8;24(2):208-220.e8 doi: 10.1016/j.chom.2018.07.006
*4. Cytometry A. (2016) Feb;89(2):196-206 doi: 10.1002/cyto.a.22787
*5. Anal. Chem. (2021) 93, 14, 5897–5905 doi.org/10.1021/acs.analchem.1c00253