TUNEL (斷裂 DNA 分析)-Cell Biology-盟基生物科技股份有限公司

Apoptosis (細胞凋亡)

TUNEL (斷裂 DNA 分析)

TUNEL (斷裂 DNA 分析)

Apoptosis (細胞凋亡)

TUNEL (斷裂 DNA 分析)

細胞凋亡實驗中,藉由 TdT 酵素標記創新CF® dye dUTP,觀察斷裂的 DNA。

細胞凋亡 (apoptosis) 為程序性的細胞死亡 (programmed cell death),由身體內或外的刺激所導致。細胞凋亡為生物體重要的生理作用,和胚胎時期的發育以及成熟體中的組織更新、免疫系統、生殖系統皆有關係。整個過程由基因所調控,導致 DNA 裂解、細胞膜變形、形成凋亡小體 (apoptotic body) 等。研究中常透過四種方法檢測細胞凋亡的早期到晚期,分別為 Annexin V apoptosis assay (細胞表面 PS 分析)、Caspase assay (凋亡蛋白酶分析)、Mitochondrial membrane potential assay (粒線體膜電位分析)、TUNEL assay (斷裂 DNA 分析) (表一)。
正常的細胞會有不同的修復系統維持 DNA 穩定性,因此染色體 DNA 很穩定。而於細胞凋亡晚期時,染色體 DNA 會開始斷裂,產生大量的3’-OH 末端,因此可透過特殊酵素 terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT),將預先標記好的 dUTP 鍵結上去。因此能夠透過觀察標記的 dUTP,反映細胞凋亡的情形 (圖一),此方法被稱為 Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL)。Biotium 提供創新CF® dye TUNEL 套組,Elabscience 則提供較經濟的 FITC/TMR Red 和能夠固色的 DAB TUNEL 套組。


表一:細胞凋亡的四種檢測方法比較
方法 Annexin V apoptosis assay
(細胞表面 PS 分析)
Caspase assay
(凋亡蛋白酶分析)
Mitochondrial membrane potential assay
(粒線體膜電位分析)
TUNEL assay
(斷裂 DNA 分析)
偵測目標 Phosphatidylserine (PS) Caspase activity Mitochondrial membrane potential Fragmented DNA
凋亡階段 Early --> --> -->Late
偵測方法 螢光 螢光、吸光值 螢光 螢光
反應時間 15-30 mins 螢光:15-30 mins
吸光值:2-4 hours
15 mins 60-120 mins
 
一、產品介紹
TUNEL 套組用來偵測細胞的染色體 DNA 有無斷裂 (圖一),染色時需要先固定細胞或組織和打洞,因此不能染色活細胞。細胞染色時間較短,大概只需一小時,而組織染色時間較長,需要到兩小時。
Elabscience 提供的 dUTP 標記為傳統染劑 FITC/TMR Red 以及 Biotin,Biotin 後續透過 Streptavidin-HRP 反應,並以 DAB 呈色,能夠以一般的顯微鏡觀察。而 Biotium 提供創新CF® dye TUNEL 套組,螢光更強也更穩定 (圖二)。除此之外,Biotium 還提供 dUTP conjugates,包含8種 CF® dye 和3種 Biotin (表三),可讓實驗者另外搭配不同螢光。
圖一:TUNEL 作用示意圖,細胞凋亡晚期的染色體 DNA 會斷裂,TUNEL 套組透過 TdT 將標記的 dUTP 鍵結到染色體 DNA 上,透過觀察標記反映細胞凋亡的情形。 圖二:Mouse mammary gland 以 CF®594 TUNEL Assay (red) 和 DAPI (blue) 染色。


二、產品優點
1. 提供標記螢光 dUTP 套組:
dUTP 本身已鍵結螢光,因此 dUTP 接上DNA 3’-OH 後可直接觀察,不需要再透過二次的鍵結,節省反應時間和步驟。

2. 同時提供創新 CF® dye 和經濟的 FITC/TMR Red:
Biotium 的創新 CF® dye 螢光更強更穩定,而 Elabscience 提供的 FITC 和 TMR Red 則較經濟。

3. 提供 DAB TUNEL,可用一般螢光顯微鏡觀察:
dUTP 以 Biotin 做標記,後續以 Streptavidin-HRP 結合,最後加入 DAB 反應,呈現褐色,因此可用一般螢光顯微鏡觀察。



三、產品資訊
Biotium 套組避光儲存於-20℃至少半年。TUNEL 套組包含 Equilibration Buffer、CF® Dye TUNEL Reaction Buffer、TdT Enzyme。
Elabscience 套組避光儲存至少一年 (#E-CK-A331 的 Streptavidin-HRP 儲存於4℃,其他試劑和套組皆為-20℃)。TUNEL 套組包含 TdT Equilibration Buffer, TdT Enzyme, Proteinase K (50×) 和修飾的 dUTP,#E-CK-A331 同時附有 DAB substrate。


表二:TUNEL 套組訂購資訊  
產品名稱 包裝 貨號 dUTP (Ex/Em)
CF®488A TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit 50 reactions 30063 CF®488A (490/515 nm)
CF®594 TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit 50 reactions 30064 CF®594 (593/614 nm)
CF®640R TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit 50 reactions 30074 CF®640R (642/662 nm)
TUNEL Assay Kit (HRP-DAB) 20T/50T/100T E-CK-A331 Biotin (x)
TUNEL Assay Kit (Enhance FITC) 20T/50T/100T E-CK-A334 FITC (490/530 nm)
TUNEL Assay Kit (Enhance TMR Red) 20T/50T/100T E-CK-A335 TMR Red (540/580 nm)
  
表三:dUTP conjugates 訂購資訊
產品名稱 包裝 貨號 Ex/Em
Biotin-11-dUTP, Lyophilized Powder 50ug 40029-1 x
Biotin-11-dUTP, 1 mM Solution 50uL 40029
Biotin-16-dUTP, Lyophilized Powder 50ug 40022-1
Biotin-16-dUTP, 1 mM Solution 50uL 40022
Biotin-16-UTP, 10 mM Solution 25uL 40023
Biotin-16-UTP, 75 mM Solution 30uL 40070
Biotin-20-dUTP, Lyophilized Powder 50ug 40030-1
Biotin-20-dUTP, 1 mM Solution 50uL 40030
CF®405S dUTP 5nmol 40004-T 404/431 nm
25nmol 40004
CF®405M dUTP 5nmol 40100-T 408/452 nm
25nmol 40100
CF®488A dUTP 5nmol 40008-T 490/515 nm
25nmol 40008
CF®543 dUTP 5nmol 40002-T 541/560 nm
25nmol 40002
CF®568 dUTP 5nmol 40005-T 562/583 nm
25nmol 40005
CF®594 dUTP 5nmol 40006-T 593/614 nm
25nmol 40006