Reverse transcription (反轉錄)-Molecular Biology-盟基生物科技股份有限公司

PCR

Reverse transcription (反轉錄)

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Reverse transcription (反轉錄)

室溫穩定的 RT 酵素試劑,操作更簡便、反應更快速!

生物實驗中,常會給予細胞一些刺激,觀察細胞內基因表現量的改變。而偵測基因表現量常用的方法之一為 qPCR,也就是偵測細胞內特定基因的 RNA 表現量。由於 RNA 極度不穩定,因此萃取 RNA 後需要進行反轉錄反應 (Reverse transcription, RT),也就是將 RNA 反轉錄成較穩定的 complementary DNA (cDNA)。Solis BioDyne 即提供方便的反轉錄試劑,操作更簡便、反應更快速。

一、產品介紹
傳統的反轉錄反應因為試劑不穩定,需要分多次步驟加入不同試劑,因此費力又費時 (圖一)。而 Solis BioDyne 的反轉錄試劑只需要添加 RNA template,一次加入所有試劑,經過 Primer annealing 5-10分鐘、Reverse transcription 15-30分鐘、Enzyme inactivation 5分鐘,即完成反應,操作更簡單、反應更快速 (圖一)。
除此之外,Solis BioDyne 酵素經過獨家專利設計,室溫非常穩定。經過實驗認證,可於室溫擺放四週後,保持相同的效率 (圖二)。除此之外,Solis BioDyne 還提供兩種酵素,針對不同 primer 所設計,適應不同實驗需求 (表一)。
圖一:和傳統法比較,Solis Biodyne RT 操作更簡單、更方便。


表一:FIREScript RT 和 SOLIScript RT 比較
  FIREScript RT SOLIScript RT
酵素來源 MMLV-based In silico designed
RNase H 活性 Full Reduced
反應溫度 37-60℃ 37-60℃
反應時間 25-45分鐘 35分鐘
搭配引子 Random, Oligo dT, Gene specific, 上述任意混合搭配 特別針對 Gene specific,不適用 random primer
應用 一般使用 特殊使用,高溫時效率較好
  

二、產品優點
1. 室溫超穩定:
室溫下可至少穩定保存一個月、4℃可至少穩定保存六個月,不影響酵素活性。因此無須冰上操作,有效避免汙染。
圖二:RNA 做兩倍稀釋後,以 FIREScript® RT 做反轉錄,並以 HOT FIREPol® EvaGreen® Supermix 分析。藍色曲線為 FIREScript® RT 酵素置於-20℃,紅色曲線則為置於室溫四週,此結果代表 FIREScript® RT 非常穩定。


2. 酵素高溫穩定:
工作溫度可到 60℃,有效解開二級結構

3. 反應快速有效率,一小時內完成
4. FIREScript ® RT 線性度最好:

針對不同表現量的基因,Solis BioDyne FIREScript ® 酵素能真實反映表現量的差異,且具有高度線性關係。
圖三:以三家套組反轉錄出 cDNA,並以 qPCR 偵測 B2M 基因表現量。 1-5 代表不同的 RNA template 含量 ,做10倍稀釋。Solis BioDyne FIREScript® 線性度最好。


5. SOLIScript® RT 針對 Gene specific primer 正確性最高:
使用 Gene specific primer 時,只會反轉錄出目標基因。為了驗證正確性,通常最後會分析 qPCR 產物 Tm 值,Tm 越集中代表產物正確性越高。圖四中可發現,其他兩家反轉錄套組皆有產生錯誤的 cDNA,導致 qPCR 產物出現 Tm 雜訊,而 SOLIScript® RT 只有單一波峰,正確性最高。
圖四:ß2M 基因使用 gene-specific primer 做反轉錄,反應溫度設為 55℃。反轉錄完成後,以 qPCR 偵測 B2M 基因,分析 Tm 值,SOLIScript® RT 專一性較高,另外兩家曲線右側有出現明顯的雜訊。


6. 兩種酵素針對不同需求 (表一)
7. 不同包裝任君選擇:

三種不同包裝,有預混包裝,使用最方便;有完整包裝,使用最彈性;有經濟包裝,價格最划算。

表二:三種型式包裝比較表
特色 名稱 管數 提供的試劑 使用者須自行準備的試劑
預混包裝 :
只需添加 RNA template,使用最快速,且減少 pipetting 誤差
RT cDNA synthesis MIX 3 1. Reverse Transcriptase Enzyme Mix (含 RiboGrip RNase inhibitor)
2. 10x RT Reaction Premix with or without primers (含 DTT, dNTPs)
3. Water, nuclease free
1. RNA template  
2. Gene specific primers
完整包裝:
可依據使用狀況調整配方
RT cDNA synthesis KIT 7 1. Reverse Transcriptase Enzyme
2. RiboGrip RNase Inhibitor
3.10x RT Reaction Buffer with DTT
4. dNTP MIX (20 mM of each)
5. Oligo dT Primer
6. Random Primers (SOLIScript® 不提供)
7. Water, nuclease free
1. RNA template  
2. Gene specific primers
經濟包裝:
單獨購買酵素較划算
RT Kit 2 1. Reverse Transcriptase Enzyme
2. 10x RT Reaction Buffer with DTT
1. RNA template
2. RNase Inhibitor
3. Oligo dT Primer
4. Random Primers (SOLIScript® 不適用)
5. gene specific primers
6. dNTP
7. Water, nuclease free
 

三、產品資訊
-20℃可長期保存,多次凍融不會影響活性。如需經常使用,可存放於4℃

表三:預混包裝 [兩管:酵素, 其他試劑 premix],輕鬆取用超方便
產品名稱 包裝 貨號
FIREScript RT cDNA Synthesis Mix with Oligo (dT) and Random primers 100rxn 06-20-00100
500rxn 06-20-00500
FIREScript RT cDNA Synthesis Mix with Oligo (dT) primer 100rxn 06-18-00100
500rxn 06-18-00500
FIREScript RT cDNA Synthesis Mix with Random primers 100rxn 06-19-00100
500rxn 06-19-00500
FIREScript RT cDNA Synthesis Mix without primers 100rxn 06-17-00100
500rxn 06-17-00500
SOLIScript RT cDNA synthesis MIX 100rxn 06-37-00100
500rxn 06-37-00500
 
表四:完整包裝 [六管:酵素, buffer, RNase inhibitor, oligo dT/random primer, dNTP],調整配方超容易
產品名稱 包裝 貨號
FIREScript RT cDNA synthesis KIT 50rxn 06-15-00050
200rxn 06-15-00200
SOLIScript RT cDNA synthesis KIT 50rxn 06-35-00050
200rxn 06-35-00200
 
表五:經濟包裝 [兩管:酵素, buffer,須額外購買 RNase inhibitor, primer, dNTP],大量實驗超省錢
產品名稱 包裝 貨號
FIREScript KIT 50rxn 06-13-00050
200rxn 06-13-00200
SOLIScript KIT 50rxn 06-33-00050
200rxn 06-33-00200
 
表六:RT 實驗相關試劑
產品名稱 包裝 貨號
M-MuLV 10KU (50rxn) E00050-10000
40KU (200 rxn) E00050-40000
dNTP Mix (80mM) 20umol 02-31-00020
100umol 02-31-00100
dNTP SET (100 mM) 25 μmol of each 100umol 02-21-00100
dNTP SET (100 mM) 100 μmol of each 400umol 02-21-00400
RiboGrip RNase Inhibitor 50rxn (1KU) 06-22-01000
200rxn (4KU) 06-22-04000
RNase H, 5u/ul 500U (250rxn) BEN0202
PCR Grade Water 100mL water-100
500mL water-500
DEPC Water 500mL DD1005
2000mL DD1005
RNase & DNA AwayTM 200 mL DB0339
RNase - free DNase Set 50 preps BS88253