Protein expression system-insect-客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

Protein expression system-insect

Protein expression system-insect

Protein Expression

Protein expression system-insect

蛋白質表現系統---Insect Cell

 

一、服務說明

GenScript已經成為提供高品質重組蛋白表現與純化服務的領導者,截至目前為止已經有 5,300個的高純度重組蛋白交付至世界各地的客戶。GenScript提供不同的蛋白質表現與純化平台,並且推動蛋白表現與純化技術的多項改進,包括了在細菌、昆蟲以及哺乳類系統。此外,GenScript亦提供優化服務以及 large-scale protein production。

桿狀病毒表達系統 (Baculovirus Expression Vector System, BEVS)藉由簡單的操作流程、蛋白表現佳以及轉譯後修飾功能,因而普遍被認為是一個強大的且通用的表達系統,用來製備大規模的重組蛋白。其產量與酵母菌系統類似,昆蟲細胞可以利用懸浮培養 (suspension culture),因此可以使用醱酵槽大量培養,甚少產生包涵體 (inclusion body)。其缺點為不能做complex glycosylation,且醣基化的組成與哺乳動物細胞培養所製備的不盡相同,此外由於利用病毒感染,因此不能進行長時間連續培養。常用的細胞株為Sf9、Sf21或Hi-5。GenScript之生產能力最高可達500 L。

蠶寶寶表達系統(Baculovirus-Silkworm)使用獨家改良的cycteine protease gene defective (CPd) Baculovirus技術製作高效價的桿狀病毒,從而增加蛋白質的表現量,並且可防止目標蛋白在蠶寶寶體內被分解。針對困難表現的蛋白或多次穿膜蛋白質都可以嘗試蠶寶寶表達系統,我們已成功表現>3,000種穿膜蛋白。



二、服務流程

1. BacuVance™ Baculovirus Expression System (SC1810)
圖一:利用昆蟲細胞-桿狀病毒系統製備蛋白服務流程圖
 
步驟 服務內容 工作天  到貨規格
全基因合成/subcloning 1. 密碼子優化&全基因合成(選擇性)
2. subclone至表現載體中
2週 Construct report
病毒製備 1. 製備重組Bacmid DNA,並轉染至昆蟲細胞
2. 製備P1病毒液 (低效價)與P2病毒液 (高效價),並利用qPCR確認病毒效價
3. 利用anti-His或anti-GST抗體確認蛋白表現
3-4週 5 ml,
>107 pfu/ml virus stock
少量蛋白製備測試 1. P2病毒液轉染昆蟲細胞
2.蛋白質純化
3. SDS-PAGE與WB檢測蛋白表現
1.5週 蛋白表現結果
(SDS-PAGE & WB)
大量表現&純化蛋白 1. 培養1 L昆蟲細胞進行蛋白表現
2. 蛋白質純化
3. QC報告
1–2週 1. 純化蛋白
2. QC報告

2. 病毒製備服務
GenScript提供重組baculovirus製備服務,保證每批次間病毒之效價與品質皆一致,均提供效價報告、具高度感染性病毒stock以及使用說明
圖二:桿狀病毒製備服務流程圖 
 
貨號 步驟 服務內容 工作天 到貨規格
- 全基因合成/subcloning 1. 密碼子優化與全基因合成(選擇性)
2. Subcloning至表現載體
2週 Construct report
SC1261 病毒製備 1. 製備重組Bacmid DNA
2. 轉染重組Bacmid DNA至昆蟲細胞
3. 製備P1病毒液 (低效價)與P2病毒液 (高效價) ,並利用qPCR確認病毒效價
4. 利用anti-His或anti-GST抗體確認蛋白表現
2-3週 Virus stock 10ml, 107 pfu/ml
SC1835 Virus stock 100ml, 107 pfu/ml
SC1840 Virus stock 100ml, 108 pfu/ml
Quote Virus stock, other volume and titer