Protein expression system-bacterial-客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

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Protein expression system-bacterial

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Protein Expression

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蛋白質表現系統—E.Coli

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一、服務說明

GenScript已經成為提供高品質重組蛋白表現與純化服務的領導者，截至目前為止已經有5,300個的高純度重組蛋白交付至世界各地的客戶。GenScript提供不同的蛋白質表現與純化平台，並且推動蛋白表現與純化技術的多項改進，包括了在細菌、昆蟲以及哺乳類系統。此外，GenScript亦提供優化服務以及large-scale protein production。

GenScript的BacPower保證方案為您的目標蛋白是以E. coli系統生產並提供前所未有的選項，可根據您的選擇達到您所要求的蛋白產量、純度、內毒素標準以及tag的保留與否，以滿足各種客戶研究需求的選項。您僅需提供蛋白序列即可，GenScript將會依據您要求的規格製作目標蛋白。所有BacPower™保證方案皆需要從GenScript獨家專利的密碼子優化服務開始，其次是全基因合成和subcloning，最後為蛋白質表現和純化系統。若你的目標重組蛋白質無法溶於inclusion body，GenScirpt亦提供了獨家FoldArt™技術，可改善您的目標重組蛋白水溶性的能力，而您無需額外支付這筆技術的費用。該服務也非常適合生產用於抗體製造的高品質蛋白質抗原。GenScript 在於蛋白質表現上擁有非常豐富的經驗，曾經表達過>6000種蛋白質，成功率高達92%以上，下圖為GenScript曾表現的蛋白質類型。
 
圖一、GenScript 的蛋白質表現經驗



表一 總覽GenScript不同系統之蛋白質純化與表現服務
  Bacterial Insect Mammalian
Strain E.coli Sf-9, Sf-21, S-2, Hi-5 CHO, HEK-293
優點 1. 便宜
2. 易操作、放大
3. 快速表現		 1. 易分泌
2. 有後轉譯修飾
3. 可表現multi-subunit 蛋白
4. 適用有毒基因蛋白		 1. 全面後轉譯修飾
2. 適用表達具活性蛋白
缺點 1. 缺乏後轉譯修飾
2. Inclusion bodies
3. 難以表現大分子的蛋白
4. 不確保真核蛋白的活性		 1. 醣基化修飾與哺乳動物略有不同
2. 生產時間長、費用高		 1. 生產時間長、費用高
2. 蛋白質產量相對底


二、服務應用

1.結構生物學 
2.功能分析
3.抗原生產 
4.蛋白與蛋白間交互作用 
5.治療用蛋白



三、服務特色

1.  保證型方案 (BacPower™ Guaranteed Bacterial protein expression packages)
I.    方案包含全基因合成，不額外收費
II.    保證方案，若未達到您指定的產量與純度均不收費
III.    最快工作天，僅需4週
客戶提供 Tag 產量 工作天 純度 內毒素選項
目標蛋白之序列 Small Tag (e.g. His) 3-10 mg 4-6週 0.85
0.9		 ≤1.0 EU/μg
≤0.1 EU/μg
≤0.01 EU/μg

2. 全客制化方案(Customized Bacterial protein expression service)
步驟 服務內容與規格 工作天 到貨規格
全基因合成與次克隆 1. 全基因合成與密碼子優化
2. Sub cloning至適合表現的載體中
3. DNA QC		 2-3週 1. Purified protein
2. 優化基因序列報告
3. QC data
小量表現測試 4mL 小量表現測試蛋白質的表現條件 0.5週
大規模蛋白純化 利用優化條件進行蛋白表現與純化 1-2週
重新折疊（選擇性） 利用high-hydrostatic-pressure技術、小分子添加劑與column-refolding 重新摺疊不溶性蛋白 0.5-1週
去除Tag（選擇性） 藉由合適的蛋白酶消化移除Tag並將無tag之蛋白分離之； 2週
QC 1. 純度分析、利用SDS-PAGE與WB偵測 (for tagged protein)
2. Bradford分析法進行定量		 0.5週