Ab & T7E1 (編輯檢測試劑)-Molecular Biology-盟基生物科技股份有限公司

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CRISPR

Ab & T7E1 (編輯檢測試劑)

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CRISPR

Ab & T7E1 (編輯檢測試劑)

以抗體確認細胞表現 Cas9 enzyme；以 T7E1 檢測基因編輯效率。

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CRISPR 被稱為第三代基因編輯技術，相較於先前的 TALEN 與 ZFN 系統而言，CRISPR 操作更簡單，且成功率更高。Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統，保護細菌免受病毒感染。CRISPR 技術是由 Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的鹼基配對互補性，專一性結合目標基因染色體 DNA，並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復，NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout)，而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin)。鹼基配對的特性使得 CRISPR 專一性更高，操作和設計更簡單，因此被廣泛應用於基因工程領域。Genscript 提供 anti-Cas9 enzyme antibody 確認細胞表現 Cas9 enzyme，以及 T7E1 檢測基因編輯效率。

一、產品介紹
使用 CRISPR 進行基因編輯時，需要有相對應的檢測試劑，第一個為 anti-Cas9 Antibody，用來確認 Cas9 蛋白質成功表現。操作 CRISPR 時，可由轉染或病毒方式 (Plasmid/Lentivirus) 送入 DNA (點選我可連結至 CRISPR plasmid)，讓細胞自己表現 Cas9 蛋白和 gRNA。另外一種方式則為 RNP system，直接送入 Cas9 蛋白和 gRNA 進入細胞 (Cas9 enzyme 產品資訊請點我；gRNA 合成服務資訊請點我)。前者必須確認質體是否正確進入細胞，以及細胞是否成功表現 Cas9；後者則必須確認蛋白是否成功送入。因此，可以 anti-Cas9 antibody 進行 Western blotting 確認上述事情。
另一檢測試劑為 T7 Endonuclease I (T7E1)，用來檢測 CRISPR 成功效率。T7E1 酵素專門辨認 DNA 上 mismatch 形成的突起，並進行雙股 DNA 裁切。若 Cas9 enzyme 和 gRNA 成功作用，則後續發生的 NHEJ 會導致染色體 DNA 上的序列改變。將實驗組別和 wild-type 的染色體 DNA分別以 PCR 放大目標基因片段，進行雜合 (hybridization)，以 T7E1 反應後，最後以 agarose gel DNA 電泳分析。若 NHEJ 成功發生，則於雜合時實驗組別的 PCR product 無法完全互補 wild-type，使 T7E1 得以作用，在 agarose 電泳中呈現較小的片段 (一個或兩個)；反之，則為一個較大的片段 (圖一)。
圖一：將 HPRT 基因的 gRNA 和 Cas9 enzyme 送入 HEK293T 細胞作用，48小時候裂解細胞，進行 T7E1 assay 分析。若 CRISPR 成功，則 T7E1 作用後出現較小的 DNA 片段。


二、產品優點
1. 抗體應用廣泛：
可用於 Western Blotting、ELISA、IHC 等實驗，附上實驗資料。
圖二：HEK293 細胞分別轉染 PX458 (pSpCas9(BB)-2A-GFP) 或未轉染，並以 Western blotting 分析 Cas9 enzyme。一抗使用 GenCRISPR SpCas9 Antibody (14B6) (#A01936) (1ug/mL)，二抗使用 Goat anti-Mouse IgG (H&L) [IRDye800] (Licor, #926-32211) (0.125ug/mL)。Lane 1: 50 µg HEK293 transfected with PX458 cell Lysate; Lane 2: 25 µg HEK293 transfected with PX458 cell Lysate; Lane 3: 10 µg HEK293 transfected with PX458 cell Lysate; Lane 4: 50 µg Untransfected HEK293 cell Lysate。

2. T7E1 enzyme皆經過測試，確保酵素有活性 (圖一)
3. T7E1 enzyme > 95% 高純度 (by SDS-PAGE)


三、產品資訊

表一：Anti-Cas9 Antibody 訂購資訊
產品名稱 貨號 包裝
GenCrispr Cas9 Antibody, pAb, Rabbit  A01885-40 40 uL
A01885-100 100 uL
GenCRISPRᵀᴹ SpCas9 Antibody (4A1), mAb, Mouse  A01935-40 40 ug
GenCRISPRᵀᴹ SpCas9 Antibody (14B6), mAb, Mouse  A01936-40 40 ug
GenCRISPRᵀᴹ SaCas9 Antibody (11C12), mAb, Mouse A01951-40 40 ug
GenCRISPRᵀᴹ SaCas9 Antibody (26H10), mAb, Mouse A01952-40 40 ug
GenCRISPRᵀᴹ FnCpf1 Antibody (9H6), mAb, Mouse A01957-40 40 ug
GenCRISPRᵀᴹ FnCpf1 Antibody (14H3), mAb, Mouse A01958-40 40 ug
 
表二：T7E1 訂購資訊
產品名稱 貨號 包裝
GenCrispr T7 Endonuclease I (10 KU/mL) Z03396-250 250 U
Z03396-1250 1250 U
 

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