一、服務介紹

圖一:三種 Cas9 作用方式,(a) 最初的 CRIPSR 作用方式,造成染色體 DNA double strand break (DSB),引發 NHEJ。(b) 特殊突變 Cas9n,只能造成染色體 DNA single strand break (SSB),需要同時有兩個位點作用才能引發 NHEJ,造成 DNA 缺失。(c) 特殊去活性 Cas9 (dCas9),不會造成 DNA 斷裂,而是攜帶活化因子促進特定基因表現 (synergistic activation mediator, SAM)。
表一:五種 Cas9 系統比較
系統名稱 | *作用方式 | 應用 | 說明 |
SpCas9 | DSB | 一般使用 | 最早應用於基因編輯的 CRISPR 系統,來自於 S. pyogenes 的 type II CRISPR 系統。 |
eSpCas9 | DSB | Off-Target 較低 | 為 SpCas9 經過三個點突變 (K848A, K1003A, R1060A),可以減少 non-target DNA 的結合,大幅提高專一性。 |
SpCas9 Nickase (Cas9nD10A) | SSB | 使用上必須同時引入兩段 gRNA,Off-Target 較低 | 為 SpCas9 經過一個點突變 (D10A),此突變會導致 Cas9 只能進行單股核酸裁切 (SSB)。使用上必須同時引入兩段 gRNA,辨認鄰近的區域 (需要是 DNA 雙股各一股),造成兩個鄰近的單股 DNA 斷裂,才能夠引發 NHEJ,造成基因缺失,因此可以大幅度降低 off-target,增加專一性。 |
SaCas9 | DSB | Cas9 蛋白質較小,AAV 包裝專用 | 來自於 Staphylococcus aureus,作用效率和 SpCas9 差不多,但是 SaCas9 蛋白質較小 (少1 kb DNA),較適合 Adeno-Associated Virus (AAV) 包裝。 |
Transcription Activation (SAM) Plasmids | SAM | 去除活性的 Cas9 (dCas9),接上 Transactivation protein,用來專一性地促進特定基因表現 | 為特殊的 CRISPR 系統,其中 Cas9 透過突變而失去核酸裁切的功能 (dCas9),同時又接上 transactivation protein (VP64),sgRNA 也經過特別設計 (加上 two MS2 RNA aptamers),用來專一性地促進特定基因表現。 |
二、服務應用
1. 針對目標基因做 knockin 或 knockout:
SpCas9, eSpCas9, SpCas9 nickase, SaCas9 皆能夠造成 DNA 雙股或單股斷裂,其中 SaCas9 適用 AAV 系統,而 SpCas9 nickase 只能造成 DNA 單股斷裂,比較資訊請參考表一。
2. 針對目標基因促進基因表現:
SAM 系統不會造成 DNA 損傷,失去活性的 Cas9 蛋白質會帶著 transactivation protein,因此反而會促進基因表現,比較資訊請參考表一。
三、服務優點
1. 免費 gRNA 資料庫:
GenScript 和張鋒實驗室共同合作 (Feng Zhang’s laboratory at the Broad Institute of MIT and Harvard),免費提供 gRNA 資料庫,資料庫中的 gRNA 序列皆已經過驗證,能夠有效地針對目標基因,讓您放心做選擇。(免費 gRNA 資料庫請點選此連結)
2. 提供 gRNA 庫存質體,最快一週到貨:
原廠提供超過 20,000 條 gRNA 庫存質體 (預設載體為 pLentiCRISPR v2),下訂後可於一週到貨。
3. 多種 Cas9 系統選擇:
五種 Cas9 系統選擇,SpCas9, eSpCas9, SpCas9 nickase, SaCas9, SAM,對應三種作用方式 (表一)。
4. 多種載體型式可選擇:
多種載體型式可選擇 [轉染用、慢病毒系統 [all-in-one 或 dual vector (gRNA 和 Cas9 分開]、AAV 系統] (完整載體資訊請點選此連結)。
四、服務方案
(1) 基因名稱 (Gene symbol/ID) or gRNA 序列
(2) 指定載體
2. 出貨規格:
(1) 4 ug 凍乾質體
(2) 定序結果