病毒中和抗體檢測 (Neutralizing Antibody Detection)-新冠病毒(SARS-CoV2)研究-盟基生物科技股份有限公司

新冠病毒(SARS-CoV2)研究

病毒中和抗體檢測 (Neutralizing Antibody Detection)

病毒中和抗體檢測 (Neutralizing Antibody Detection)

新冠病毒(SARS-CoV2)研究

病毒中和抗體檢測 (Neutralizing Antibody Detection)

GenScript 新推出無病毒的中和抗體檢測套組,實驗更安全。另外提供假病毒製備服務,以及假病毒中和實驗服務,用以篩選抑制病毒感染的抗體或小分子藥物。

病毒感染人體後,免疫系統會產生抗體,依據抗體對於病毒的結合方式可分成兩類:Binding antibody (結合抗體) 和 Neutralizing antibody (中和抗體)。Binding antibody 雖然會結合病毒,但是無法抑制病毒感染細胞,反而有可能造成 Antibody-dependent enhancement (ADE),促進病毒感染。而 Neutralizing antibody 能夠結合病毒辨認細胞的位置,進而抑制病毒感染。GenScript 提供無病毒檢測套組、假病毒以及假病毒檢測的服務,可應用於 (1)疫苗開發 (2)抗體藥篩選 (3)群體免疫研究 (Herd immunity)。
無病毒檢測套組和假病毒檢測服務的比較



一、SARS-CoV2 中和抗體檢測套組 (SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit)
(Research use only)
傳統上要檢測 Virus neutralization antibody (VNT) 需要活的病毒,危險性較高,需要 BSL3 實驗室。後來發展的 pseudovirus 危險性較低,但依然需要 BSL2 實驗室。而此套組在一般的實驗室裡操作即可,非常安全,操作也很簡單。目前市面上的 ELISA 或 lateral flow assay 只能偵測 Binding antibody,因此此套組適用於新冠病毒 (2019-nCoV, SARS-CoV2) 的疫苗開發或抗體藥篩選。此方法已經發表於期刊,證明其功效,更多資訊請參考完整文獻

ELISA plate 已經吸附 ACE2 蛋白,實驗樣本先和 HRP-RBD 反應,再一起加入 ELISA 反應,最後以 TMB 呈色。如果樣本中沒有 Neutralizing antibody,則 HRP-RBD 會結合 ACE2,進而呈色。反之,若樣本中有 Neutralizing antibody,則吸光值降低。套組中有附上 positive control 和 negative control,若樣本吸光值小於0.8倍 negative control,則此樣本定義成 “有 Neutralizing antibody”。詳細步驟請參考原廠網頁
優點有 (1)沒有病毒,實驗更安全 (2)和物種 & 抗體 isotype 無關,適用性更廣 (3)操作簡單,只要1-2小時


(左) 傳統上以活病毒偵測 Neutralizing antibody (右) 此套組檢測原理,實驗更安全,操作更簡單。更多資訊請參考完整文獻




二.假病毒製備 (Pseudovirus packaging)
Pseudovirus 為 Lentivirus 的 Envelope glycoprotein 置換成 S protein,而病毒的染色體裡可加入不同基因,可做為”核酸檢測實驗中的對照組”或”中和作用測試”。中和作用的應用可參考下方「病毒中和實驗服務(Pseudovirus neutralization assay)」。除此之外,GenScript 也提供穩定表現 ACE2 的細胞株

* VSVG-Virus 為慢病毒的外殼,用來與 Pseudovirus 做對照


三、病毒中和實驗服務(Pseudovirus neutralization assay)
假病毒的染色體裡面包含冷光報導基因,將製作好的病毒和待測試的藥物 (如抗體) 一起加入細胞,並檢測冷光。如果抗體能夠阻擋病毒的感染,則冷光會顯著地降低,反之則不會。



1.服務內容:
售價$150,000,方案二選一
(1).8個樣本單一濃度測試
(2).單一樣本序列稀釋濃度測試 (8個濃度,由客戶指定濃度)
*每個樣本 (或單一樣本的每個濃度) 預設三重複,若需要加重複數,需要另外加收費用。
*免費附上三個對照組:ACE2-Fc 组 (陽性對照組,冷光降低)、病毒感染组 (陰性對照組,冷光增加) 和只有细胞組 (冷光背景值)。預設是單個濃度,若需要做曲線,需加收費用。
*交期:1-2週 (不含國際運送時間)
*加購:
(1).每多「單一樣本序列稀釋濃度測試」:$72,000,
(2).每多「1個樣本單一濃度測試」:$9,000。

*註:此服務只有基本的組合計價方式,如果為比較特別的組合,如兩個樣本各三個濃度,請提供確實的需求,我們將以專案的方式向原廠詢價。


2.客戶需提供:
(1).待測試的抗體或藥物,需符合以下標準:
  • *如果是純化抗體,則需提供 ≥20 μg neutralization antibody for single dose screening;or ≥200 μg for dose curve test。
  • *如果是細胞培養上清液,則需提供 antibody ≥1μg/ml, more than≥500μl (根據培養液條件,會有部分抗體拿去做預測試)
  • *如果是小分子藥物,則請提供足夠量的藥物。
(2).測試時的陽性控制組
建議客戶提供,如果客戶不能提供也沒關係,原廠有內部自己研發的候選抗體,或是選用 ACE2-Fc fusion protein (Z03484) 也可以。


3.其他由原廠提供材料:
(1).Pseudovirus:表現 S 蛋白
(2).目標細胞:原廠現階段已建立好 Hela/ACE2 和 HEK293/ACE2,由客戶選擇細胞。(兩種細胞效果差不多,原廠目前預設使用 Hela/ACE2,由於排程問題,如選擇 HEK293/ACE2交期要延長1-2週)


4.出貨規格:
Neutralization activity test 報告
(QC 標準:訊號為背景值100倍以上 (S/N >100),足以證明細胞層面的作用。)


5.好處:
(1).Pseudovirus designation, packaging, infection and assay performance 都已經過優化,可以省下客戶大量時間。
(2).交期快:1-2週
(3).高專一性:專一性檢測病毒是否進入細胞
(4).高靈敏度:S/N>100



實例:左圖表示有感染病毒的冷光強度遠高於未感染組別,右圖顯示冷光強度隨著抗體濃度增加而降低。
 
12345689