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想成為基因編輯大師嗎? 快來購買CRISPR產品吧!

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快來購買 CRISPR 產品,訓練你專屬的神奇細胞吧! 完整PDF檔下載

單筆訂購達10,000 元者,享T7 Endonuclease I 半價優惠! (貨號:Z03396-250)

活動時間:2020 / 7 / 1 — 2020 / 8 / 30 為止!  (本次優惠活動需隨貨開立發票)

 

GenScript 和張鋒實驗室共同合作,免費提供 gRNA 資料庫和設計軟體

  1. 起源:Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated protein (Cas) 為細菌特殊的免疫系統,保護細菌免受病毒感染,被科學家們應用於基因編輯。
  2. 優點:以 RNA 探針鹼基配對的方式辨認到目標基因,專一性更高,操作和設計更簡單。
  3. 機制:Cas9 蛋白質透過 gRNA 和目標基因的互補性,專一性結合目標基因染色體 DNA,並進行雙股裁切 (double strand break, DSB)。而發生 DSB 的染色體會以兩種方式修復(下圖),NHEJ (non-homologous end joining) 容易造成基因功能缺失 (knockout),而 HDR (homology-directed repair) 引入 ssDNA template 則可以插入或置換特定序列 (knockin)。


*盟基提供您 CRISPR 全系列產品,包括 gRNA plasmid, RNP system (Cas9 protein & sgRNA), stable cell line service, ssDNA, Cas9 antibody, T7E1



 
一、CRISPR Stable Cell Line 動物細胞株建構服務 — 直接完成最省事!

✓ 應用:直接建構完 knockout/knockin 細胞株,省去大量時間和人力。
✓ 優點:
  1. 提供整套服務,從 gRNA 設計、建構質體、引入細胞到單一細胞株建構和鑑定。
  2. 可加購 Promoter 和轉染條件優化 (Promoter activity survey, Transfection optimization)。
  3. 除了序列比對分析,還可以加購後續功能性分析 (qPCR, Western blotting, FACS analysis, Off-target analysis)。
  



二、CRISPR Microbial Gene Editing 細菌株建構服務
✓ 原理:對 bacteria ( E. coli ) 做基因編輯,包含 Knockin 和 Knockout
✓ 優點:Western blotting 中作 Normalization,效果比 Loading control 更準確
  1. 採用獨家 λ Red-CRISPR/Cas9 系統,讓基因取代更有效率
  2. 可同時 knockout 至多三個基因
  3. 除了序列比對分析,還可以加購後續功能性分析 (qPCR, Western blotting, FACS analysis, Off-target analysis)
   



三、CRISPR RNP system — DNA-free  更安全

進行 CRISPR 實驗時,可以由轉染或病毒方式 (Plasmid/Lentivirus) 送入 DNA,讓細胞自己表現 Cas9 蛋白和 gRNA。另外一種方式是 Ribonucleoprotein (RNP) system,直接送入 Cas9 蛋白和 gRNA 進入細胞,因此為 DNA-free 系統,可避免外源 DNA 嵌入細胞染色體,降低突變機率。GenScript 提供高純度 Cas9 蛋白 & gRNA, crRNA/tracrRNA,可降低 in vitro transcription (IVT) RNA 造成的細胞毒性。

A、crRNA/tracrRNA & sgRNA 

✓ 種類:(A)CRISPR RNA (crRNA) / trans-activating crRNA (tracrRNA) duplex & (B) guide RNA (sgRNA)(表一)
✓ 優點:
  1. RNase-HPLC 純化,高純度、無 RNase 汙染。
  2. 和 in vitro transcription (IVT) RNA 相比,使用較方便,細胞毒性較低。
    
✓ 客戶提供:
  1. crRNA/tracrRNA或gRNA 序列 (自行設計or Database 查詢:網址連結)
  2. 如選擇 sgRNA,請選擇方案EasyEdit or SafeEdit (表二)
✓ 出貨規格:
  1. 凍乾 RNA
  2. 分析報告 MS (SafeEdit 還有 HPLC)
    *sgRNA 為較新的技術,事先已經共價連接 crRNA 和 tracrRNA,本身結構更穩定,不會斷開來,使用起來也比較方便,省去 hybridization 的時間。原廠實際使用起來,的確發現基因編輯的效率比較好。

  
*推薦使用 SafeEdit sgRNA,保證純度>90%,更適合細胞實驗。


B、CRISPR Cas9 Enzyme
✓ 優點:
  1. 高生物活性:皆經過 in-vitroin-vivo assays 測試,確保酵素有活性。
  2. Cas9 上 fusion nuclear localization signal (NLS),幫助 Cas9 蛋白進入細胞核。
  3. > 95% 高純度 (by SDS-PAGE)
  4. 低內毒素  (<0.1 EU/ug)
  5. 無 RNase & DNase 汙染
  



四、CRISPR 基因編輯檢測試劑 — CRISPR 檢測好輕鬆
使用 CRISPR 方法進行基因編輯時,需要有相對應的檢測試劑,需要以 anti-Cas9 Antibody 確認 Cas9 蛋白質成功表現,再以 T7 Endonuclease I (T7E1) 確認細胞的染色體 DNA 是否成功發生 NHEJ。
  


五、CRISPR gRNA Plasmid — 質體使用最簡單
A. 庫存現貨質體 — 最方便的庫存質體 & 最厲害的設計軟體
所有庫存質體一律 $5,500,三個以上特價每個 $3,900

✓ 應用:以質體於細胞中表現 Cas9 蛋白 & gRNA RNA,針對特定基因作用。
✓ 優點:
  1. 和張鋒實驗室共同合作  (Feng Zhang' s laboratory at the Broad Institute of MIT and Harvard),免費提供 gRNA 資料庫和設計軟體。網址連結
  2. 超過 20,000 條 gRNA 庫存質體 (預設載體為 pLentiCRISPR v2),下訂後可於一週到貨。
  3. 五種 Cas9 系統選擇,SpCas9, eSpCas9, SpCas9 nickase, SaCas9, SAM,對應三種作用方式。
  4. 多種載體型式可選擇(A)轉染用、(B)慢病毒系統:all-in-one 或 dual vector (gRNA 和 Cas9 分開)、(C)AAV 系統]。
✓ 客戶提供:
  1. 基因名稱 (Gene symbol/ID)
  2. 指定載體
✓ 出貨規格:
  1. 4 ug 凍乾質體
  2. 定序結果

  

 
*不同的 Cas9 選擇,可以造成 DNA 雙股斷裂 (double strand break, DSB)、DNA 單股斷裂 (single strand breakㄝ, SSB)、促進基因表現 (synergistic activation mediator, SAM),多種方式任君選擇。


B. 高通量篩選 Plasmid Library — 針對所有基因一次篩選,快速找到目標研究基因
✓ 應用:為已經建構好的 CRISPR plasmid library,針對 Human 或 Mouse 全部基因一次做大量的篩選,快速找到導致 Phenotype 改變的基因。分三種設計好的 Library,省下設計時間和人力。也可客製化設計專屬的 Library 喔!
✓ QC:經過 NGS 測序,確保 Library diversity!


 



六、CRISPR Knockin 專用 ssDNA

✓ 應用:使用於基因置入 (knockin),比 Plasmid DNA 和 dsDNA 效率更高且毒性較低。
✓ 優點:
  1. 兩輪定序確保序列 100% 正確
  2. 低化學物質殘留,直接實驗不害怕
  3. 無 dsDNA 汙染 & DNA base damage
  4. 專業合成技術可到 5000 nt (需評估序列)
✓ 客戶提供:
  1. ssDNA 序列
  2. 產量
✓ 出貨規格:
  1. 凍乾 ssDNA
  2. 定序報告
  3. 純度測試報告 (by gel electrophoresis)
  
*Plasmid DNA 和 PCR product (dsDNA) dsDNA) 皆為雙股 DNA,對於細胞有較高的毒性,且容易隨機插入細胞的染色體 DNA,造成無法預期的突變。而 ssDNA 則毒性較低,插入細胞 DNA 的機率也較低,同時因為需要較少的酵素餐與,因此成功 Knockin 的機率較高。