蛋白實驗雙響砲-客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

客製化抗體-盟基生物科技股份有限公司

蛋白實驗雙響砲

完整PDF檔下載
 

蛋白實驗雙響砲  
電泳好幫手 + 染膠多選擇
提供 Cavoy 蛋白電泳全系列產品 (型錄下載)

2020/2/1-2/27



一、蛋白質膠染色 gel staining — 一般照相觀察
I.快速蛋白安全染劑 Safe dye

Bio Basic, Biotium
✓ 應用:更安全的蛋白質膠染色,不需要使用醋酸 or 甲醇
✓ 優點:反應更快速、靈敏度更高


One-Step Blue® Protein Gel Stain 可同時肉眼和螢光觀察 

 
Protein Ladder 兩倍序列稀釋,跑完電泳,染色60分鐘。(A) 肉眼觀察藍色訊號。(B) 波長800 nm 螢光 (近紅外光) 觀察。框框顯示蛋白質量 (ng)。
 




II. 特殊負染劑 Negative staining
Bio Basic
✓ 應用:適合酵素活性和 MS 分析 (負染不會作用於蛋白質本身)
✓ 原理:金屬離子 沉澱作用於膠體中  (Zinc 會形成濁白色,Copper 會形成綠色),而 SDS coating 的蛋白質無法被染色,因此為負染
✓ 優點:
1. 染劑可以洗掉 (15分鐘)
2. 相容於下游 Western blotting 實驗


左:Protein Stain-EZ B, Reversible Zinc Stain Kit 染色完在膠體下方放上黑紙,因此蛋白質位置呈現黑色 (不染色),膠體呈現白色。
右:Reversible Copper Stain Kit (Protein Stain-EZ C), 10prep 染色完膠體呈現綠色,蛋白質的位置不染色。


 


III.磷酸化蛋白質染色
Bio Basic
Protein Stain-EZ J Phosphoprotein Staining Kit (20 rxns, #BSP043,售價:4,200)
✓ 應用:專門染色膠體中的磷酸化蛋白質 (只針對 phosphoserine & phosphothreonine ),觀察細胞磷酸化蛋白質的分布和變化,取代以磷酸化抗體做 Western blotting
✓ 靈敏度:每一個磷酸化蛋白的靈敏度不同,跟此蛋白的磷酸化程度有關
✓ 優點:減少 Western blotting 磷酸化抗體時間

磷酸化蛋白質呈現綠色


IV.傳統 Coomassie blue 染劑
Bio Basic
✓ 應用:蛋白質膠染色,染色所有蛋白質呈藍色

 


二、蛋白質膠染色 gel staining—高階螢光觀察
I.膠體螢光染色
Biotium
One-Step Lumitein™ Protein Gel Stain 系列
✓ 應用:染色所有蛋白質,螢光觀察靈敏度超高,適合微量蛋白質
✓ 優點:
1. 一步驟完成,不需要固定和退染 (5-60分鐘)
2. 安全無毒,不添加 acetic acid, methanol
3. 可應用於下游分析 - Mass與Edman多肽定序

 
 


Unstained Precision Plus Protein™ Standard (Bio-Rad) 兩倍序列稀釋後,跑完電泳,並以 (A) One-Step Lumitein™ 染色30分鐘 (B) One-Step Lumitein™ UV 染色60分鐘,以 UV transilluminator 觀察紀錄。




II.蛋白質鍵結螢光套組
Biotium
VersaBlot™ Total Protein Normalization Kits
✓ 原理:預先在蛋白質樣本上共價鍵結螢光染劑,因此可於電泳後或轉漬後,直接觀察膠體或轉漬膜中所有蛋白質的螢光 (Near-infrared )
✓ 應用:Western blotting 中作 Normalization,效果比 Loading control 更準確
✓ 優點:
1. 反應快速又簡單:30分鐘+不須純化
2. 靈敏度高 (1 ng)
3. 耐受 SDS, glycerol 和多種鹽類
4. 螢光染劑穩定:可直接接續 blocking 和抗體反應
5. 反應具可逆性:可去掉螢光染劑,接續抗體多螢光偵測

✓ 反應流程示意圖

    

✓ 資料佐證
1.靈敏度超高 (1 ng)

 
BSA 以 VersaBlot™ total protein normalization kit 標記後,進行 SDS-PAGE,並觀察螢光。
(左到右為10ug-1ng)



2.Normalization 效果比 Loading control 更優
 
序列稀釋後的 HeLa cell lysate 以 VersaBlot™ total protein normalization kit (CF770T) 標記,並經過 SDS-PAGE 和轉漬。(A) 直接觀察轉漬膜螢光。(B) 以 anti-tubulin 一抗和 CF770T 二抗做偵測。(C) 以螢光強度對蛋白質總量線性作圖,VersaBlot™ 線性度較好。
 

各項產品比較表




三、方便使用預製膠 + 膠體預混溶液
I.Pre-cast gel 梯度膠必備款
GenScript
SurePAGEᵀᴹ precast gels (10X8)
價格最划算,效果再升級!
✓ 應用:蛋白質電泳預製膠,可直接使用,省下鑄膠時間
✓ 優點:
1. 高穩定性:Bis-Tris 系統,中性 pH 值,降低 acrylamide 水解 (4oC 保存一年)
2. 方便簡單:Well 體積大又寬,標示清楚好 loading
3. 再現性高:品質穩定,批次間差異小

✓ 必須搭配 MES or MOPS running buffer
    原價1,500,加購價只要 $500/組
  

✓ 適用於所有電泳系統
  

✓ urePAGE 和他家比,解析度更漂亮
  

✓ 使用 LDS sample buffer 解析度更好
   
 
 
 
單次買10組,優惠價 2,500/組

II.預混型蛋白膠體製備試劑
T-Pro EZ Gel Solution
預先混合緩衝液和 acrylamide,不須接觸高濃度 acrylamide,只需加入 TEMED 和 APS 即可鑄膠
1. 效果堪比梯度膠
2. 不須做上膠
3. 15分快速凝膠 
4. 室溫保存超穩定

 
比較 T-pro EZ gel solution 與市售 gradient gel 跑膠效果
左圖:T-pro EZ gel solution 單一濃度即可做出 gradient gel 效果
右圖:市售 Gradient gel 跑膠結果

 
*使用 Tris-Glycine 系統

III.傳統上下膠預混溶液
OmicsBio
✓ 預先混合蛋白電泳緩衝液,省下調整 pH 時間
 
*使用 Tris-Glycine 系統,須外加 Acrylamide, APS, TEMED



四、多樣化蛋白質標準品 Protein Ladder
I. Western 壓片專用蛋白質標準品:
WB-MASTER Protein Standard
一起壓片好方便
(#M00521, 250 uL, 售價1,900)
本身沒有顏色,但是能夠結合 IgG 的 Fc 區域,直接捉取一抗和二抗,因此可和樣本一起成色
  

II. 一般蛋白電泳標準品:
✓ AccuRuller RGB Prestained Protein Ladders 
(OmicsBio, #02101-250, 250 uL, 售價 2,200)
盟基經濟人氣款,買一送一
 

✓ BLUelf Prestained Protein Marker 
(GeneDireX, #PM008-0500, 500 uL, 售價 3,600)
大小蛋白通通包,買一送一
 

✓ Broad Multi Color Pre-Stained Protein Standard
(GenScript, #M00624-250, 250 uL, 售價 4,200; #M00624-1250, 250 uL x5, 售價16,600)
四種顏色最清晰
 


五、Buffer & Chemicals
GenScript, Bio Basic, OmicsBio

I. 電泳緩衝液 Running buffer
✓ Tris-glycine, Tris-tricine, MES, MOPS running buffer powder
✓ Tris-glycine running buffer
  

II. Protein sample buffer
4X LDS Sample Buffer, 4X T-Pro Laemmli (SDS sample) Reagent, 5X Sample Buffer, 6X Protein Loading Buffer (2ME)
 

III. Reducing agent
beta-Mercaptoethanol (ME), DTT (Cleland's reagent)
    

IV. Tris powder
Tris, Tris hydrochloride, Tricine, Bis-Tris
   

V. Tris buffer
Tris-HCl buffer,全品項任意搭配買三送一
 

VI. Tracking dye
Bromophenol blue, Xylene cyanol FF
 

VII. Others
Ammonium persulfate [APS], TEMED, glycine, SDS